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中华细胞与干细胞杂志(电子版)

中华细胞与干细胞杂志(电子版) ›› 2025, Vol. 15 ›› Issue (02) : 65 -74. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2025.02.001

论著

过表达POSTN 的间充质干细胞来源外泌体增强肝脏再生能力
张剑豪1, 蔡丹文2, 蒋辰浩1, 张宇君1, 韩路1, 赵雪刚3, 吕行3, 萧家麒1, 张杰滨1, 隋昕3, 张英才1,4,†()   
  1. 1. 510630 广州，中山大学附属第三医院肝脏外科肝移植中心
    2. 511436 广州，广州医科大学
    3. 510630 广州，中山大学附属第三医院外科ICU
    4. 830054 乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院肝胆胰中心
  • 收稿日期:2024-12-13 出版日期:2025-04-01
  • 通信作者: 张英才
  • 基金资助:
    国家重点研发计划项目 (2024YFA1107200)国家自然科学基金面上项目 (82270689)国家自然科学基金区域联合基金项目 (U24A20655)新疆杰出青年科学基金 (2024D01E21)广州市科技计划项目(2024A03J0273)广州地区临床高新、重大、特色技术项目 (2023P-GX05)新疆维吾尔自治区人民医院肝移植专项 (20240101)

Exosomes derived from mesenchymal stem cell overexpressing periostin enhanced liver regeneration capacity

Jianhao Zhang1, Danwen Cai2, Chenhao Jiang1, Yujun Zhang1, Lu Han1, Xuegang Zhao3, Xin Lv3, Jiaqi Xiao1, Jiebin Zhang1, Xin Sui3, Yingcai Zhang1,4,†()   

  1. 1. Department of Liver Surgery，Liver Transplantation Center，the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630，China
    2. Guangzhou Medical University，Guangzhou 511436，China
    3. Surgical ICU，the Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630，China
    4. Hepatobiliary and Pancreatic Center，People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830054，China
  • Received:2024-12-13 Published:2025-04-01
  • Corresponding author: Yingcai Zhang
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引用本文：

张剑豪, 蔡丹文, 蒋辰浩, 张宇君, 韩路, 赵雪刚, 吕行, 萧家麒, 张杰滨, 隋昕, 张英才. 过表达POSTN 的间充质干细胞来源外泌体增强肝脏再生能力[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2025, 15(02): 65-74.

Jianhao Zhang, Danwen Cai, Chenhao Jiang, Yujun Zhang, Lu Han, Xuegang Zhao, Xin Lv, Jiaqi Xiao, Jiebin Zhang, Xin Sui, Yingcai Zhang. Exosomes derived from mesenchymal stem cell overexpressing periostin enhanced liver regeneration capacity[J/OL]. Chinese Journal of Cell and Stem Cell(Electronic Edition), 2025, 15(02): 65-74.

目的

探讨过表达骨膜蛋白 （POSTN）的间充质干细胞 （MSCs）来源外泌体对肝再生的促进作用及其机制。

方法

切除小鼠70 %的肝脏构建小鼠肝部分切除模型，术后通过尾静脉分别注射PBS （PBS 组）、MSCs 外泌体 （MSC-Exo 组）和过表达POSTN 的MSCs 外泌体 （MSC-ExoPOSTN 组）。收集各组小鼠肝切术后72 h 的肝组织，通过免疫荧光染色测定Ki-67 及Western blot 检测增殖细胞核抗原 （PCNA）评估肝细胞增殖情况；RT-qPCR 及Western blot 测定促再生因子［如肝细胞生长因子 （HGF）、白细胞介素-6 （IL-6）等］在肝组织mRNA 及蛋白表达水平；构建MSC-ExoPOSTN 与AML-12 肝细胞共培养体系，通过Western blot 以及RT-qPCR 测定PCNA、PI3K、p-PI3K、p65 和p-p65 表达水平。两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 LSD-t 检验。

结果

与PBS 组相比，MSC-ExoPOSTN 组肝体重比 ［（3.63 ± 0.06）%比（2.96 ± 0.08）%］、肝组织中PCNA蛋白水平 （0.62 ± 0.02比0.32 ± 0.03）、Ki-67 阳性细胞比例 ［（39.33 ± 2.87）%比 （21.03 ± 1.63）%］、肝再生因子HGF mRNA（1.66 ±0.06 比0.99 ± 0.09）、HGF 蛋白水平 （1.98 ± 0.12 比1.00 ± 0.19）、IL-6 的mRNA 表达 （1.87 ±0.07 比1.09 ± 0.12）及蛋白水平 （1.51 ± 0.04 比0.97 ± 0.07）上调；与MSC-Exo 组相比，MSCExoPOSTN 组肝体重比 ［（3.63 ± 0.06）%比（3.28 ± 0.06）%］、肝组织中PCNA 蛋白水平 （0.62 ±0.02 比0.51 ± 0.02）、Ki-67 阳性细胞比例［（39.33 ± 2.87）%比（30.33 ± 1.70）%］、HGF mRNA（1.66 ± 0.06比1.32 ± 0.10）、HGF蛋白水平 （1.98 ± 0.12比1.50 ± 0.09）、IL-6 （1.87 ± 0.07比0.77 ±0.08）的mRNA 表达及蛋白水平 （1.51 ± 0.04 比0.79 ± 0.06）上调 （P 均＜ 0.05）。MSC-ExoPOSTN与AML-12 肝细胞共培养体系中，与PBS 组相比，MSC-ExoPOSTN 组的PCNA 蛋白水平 （0.81 ±0.06 比0.32 ± 0.03）、p-p65 蛋白水平 （1.15 ± 0.10 比0.81 ± 0.14）上调（P 均＜ 0.05），p-PI3K 蛋白水平差异无统计学意义；与MSC-Exo 组相比，MSC-ExoPOSTN 组的PCNA 蛋白水平 （0.81 ± 0.06比0.49 ± 0.04）、p-p65 蛋白水平 （1.15 ± 0.10 比0.51 ± 0.07）上调 （P 均＜ 0.05），p-PI3K 蛋白水平差异无统计学意义。给予NF-κB JSH23后，与PBS组相比，JSH组的PCNA mRNA 水平 （1.01 ±0.09 比1.59 ± 0.07）下调 （P ＜ 0.05）。

结论

本研究证实MSC- ExoPOSTN 促进肝切除后肝再生并且可能是通过激活肝细胞内NF-κB 信号通路实现的。

关键词: 肝部分切除术, 间充质干细胞, 外泌体, 肝再生, 肝细胞生长因子

Objective

To investigate the promoting effect and mechanism of exosomes derived from mesenchymal stem cells （MSCs） overexpressing periostin （POSTN） on liver regeneration.

Methods

A 70 % partial hepatectomy （PHx） model was established in mice， and mice were administered PBS （PBS group）， MSCs-derived exosomes （MSC-Exo group）， or POSTN- overexpressing MSCs-derived exosomes （MSC-ExoPOSTN group） via tail vein injection after operation.Liver tissues were collected 72 h after operation.Hepatocyte proliferation ability was assessed by immunofluorescence staining for Ki-67 and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）was detected by Western blot to evaluate hepatocyte proliferation.mRNA and protein levels of pro- regenerative factors （e.g.， HGF， IL-6） in liver tissues were measured via RT-qPCR and Western blot.A co-culture system of MSC-ExoPOSTN with AML-12 hepatocytes was established， and the expression of PCNA， PI3K， p-PI3K， p65， p-p65 were detected by Western blot and RT-qPCR.The difference between two groups was compared by independent samples t-test and the difference among multi-group was compared by one-way ANOVA.LSD-t test was used for pairwise comparison between different groups.

Results

Compared with PBS group， liver-to-body weight ratio ［（3.63 ±0.06）% vs （2.96 ± 0.08）%］， PCNA protein levels （0.62 ± 0.02 vs 0.32 ± 0.03）， Ki-67-positive cell ratio ［（39.33 ± 2.87）%vs （21.03 ± 1.63）%］， HGF mRNA （1.66 ± 0.06 vs 0.99 ± 0.09） and protein levels （1.98 ± 0.12 vs 1.00 ± 0.19）， and IL-6 mRNA （1.87 ± 0.07 vs 1.09 ± 0.12） and protein levels （1.51 ± 0.04 vs 0.97 ± 0.07） were increased in MSC-ExoPOSTN group （all P ＜ 0.05）.Compared with MSC-Exo group， liver-to-body weight ratio ［（3.63 ± 0.06）% vs （3.28 ± 0.06）%］， PCNA protein levels （0.62 ± 0.02 vs 0.51 ± 0.02）， Ki-67-positive cell ratio ［（39.33 ± 2.87）% vs （30.33 ±1.70）%］， HGF mRNA （1.66 ± 0.06 vs 1.32 ± 0.10） and protein levels （1.98 ± 0.12 vs 1.50 ± 0.09），and IL-6 mRNA （1.87 ± 0.07 vs 0.77 ± 0.08） and protein levels （1.51 ± 0.04 vs 0.79 ± 0.06） were increased in the MSC-ExoPOSTN group （all P ＜ 0.05）.In the MSC-ExoPOSTN and AML-12 hepatocyte co-culture system， compared with PBS group， the expression levels of PCNA（0.81 ± 0.06 vs 0.32 ±0.03） and p-p65 protein （1.15 ± 0.10 vs 0.81 ± 0.14） were increased in MSC-ExoPOSTN group （both P ＜ 0.05）， while p-PI3K level remained unchanged.Compared with MSC-Exo group， the expression levels of PCNA （0.81 ± 0.06 vs 0.49 ± 0.04） and p-p65 protein （1.15 ± 0.10 vs 0.51 ± 0.07） were increased in MSC-ExoPOSTN group （both P ＜ 0.05）， while p-PI3K level remained unchanged.Compared to PBS treatment， the PCNA mRNA level was reduced after treatment with NF-κB inhibitor JSH23 （1.01 ± 0.09 vs 1.59 ± 0.07， P ＜ 0.05）.

Conclusion

MSC-ExoPOSTN enhances liver regeneration post- hepatectomy， potentially via activation of the NF-κB signaling pathway in hepatocytes.

Key words: Partial hepatectomy, Mesenchymal stem cells, Exosomes, Liver regeneration, Hepatocyte growth factor
表1 引物序列信息
基因 序列（ 5' → 3'） 预期扩增产物长度（ bp）
POSTN 上游TGGTATCAAGGTGCTATCTGCG 135
下游AATGCCCAGCGTGCCATAA
VEGF 上游TTTGCCAATCACACTTCCTGC 102
下游ACACTGTGGTAATGTTGCTGG
HGF 上游ACTTCTGCCGGTCCTGTTG 222
下游CCCCTGTTCCTGATACACCT
IL-6 上游CAACGATGATGCACTTGCAGA 201
下游TCTCTCTGAAGGACTCTGGCT
PCNA 上游TTGCACGTATATGCCGAGACC 183
下游GGTGAACAGGCTCATTCATCTCT
GAPDH 上游AATGGATTTGGACGCATTGGT 213
下游TTTGCACTGGTACGTGTTGAT
图1 光学显微镜下观察MSCs 形态 （×100）
图2 流式细胞仪检测MSCs 表面免疫表型 注：a ～ c 图分别为CD105、CD34、CD45
图3 RT-qPCR 及Western blot 检测POSTN mRNA 水平及蛋白水平 注：a 图为POSTN mRNA 水平，b 图为POSTN 蛋白水平，***P ＜ 0.001，ns 为差异无统计学意义
图4 过表达POSTN 的MSC-Exo 的鉴定 注：a 图为透射电子显微镜下观察MSC-Exo，b 图为MSC-Exo 纳米颗粒追踪；c 图为Western blot 检测POSTN 表达水平
图5 光学显微镜与荧光显微镜观察肝除切术后各组小鼠肝脏 注：与PBS 和MSC-Exo 相比，MSC-ExoPOSTN 处理表现出更强的促进肝脏体积恢复、组织恢复以及增强肝细胞增殖的能力
图6 不同处理组肝脏增殖水平评估 注：a 图为各组肝体质量比，b 图为Ki-67 阳性细胞百分比，c 图为PCNA 的蛋白表达水平，*P ＜ 0.05， **P ＜ 0.01， ***P ＜ 0.001
图7 Western blot 检测VEGF、HGF、IL-6 的mRNA 及蛋白表达水平
表2 MSC-ExoPOSTN 对肝再生相关因子表达的影响 （ ± s）
分组 实验次数 HGF mRNA HGF 蛋白 IL-6 mRNA IL-6 蛋白 VEGF mRNA VEGF 蛋白
PBS 3 0.99 ± 0.09 1.00 ± 0.19 1.09 ± 0.12 0.97 ± 0.07 1.00 ± 0.20 1.00 ± 0.20
MSC-Exo 3 1.32 ± 0.10a 1.50 ± 0.09a 0.77 ± 0.08a 0.79 ± 0.06a 1.19 ± 0.05 1.03 ± 0.17
MSC-ExoPOSTN 3 1.66 ± 0.06ab 1.98 ± 0.12ab 1.87 ± 0.07ab 1.51 ± 0.04ab 1.21 ± 0.07 1.08 ± 0.14
F值 46.720 23.880 75.980 82.340 2.249 0.100
P值 ＜ 0.001 ＜ 0.001 ＜ 0.001 ＜ 0.001 0.187 0.907
图8 荧光显微镜下观察MSC-ExoPOSTN 被肝细胞内吞 （×20）
图9 MSC-ExoPOSTN 激活NF-κB 信号通路促进肝细胞增殖 注：a 图为Western blot 检测PCNA、PI3K、p-PI3K、p65、p-p65 的蛋白表达情况；b 图为MSC-ExoPOSTN 处理后的AML-12 细胞使用PBS 或使用NF-κB 信号通路抑制剂JSH23 后PCNA 的mRNA 表达水平；**P ＜ 0.01
表3 不同处理组对PCNA、p-p65、p65、p-PI3K、PI3K 蛋白表达的影响 （ ± s）
分组 实验次数 PCNA/α-tubulin p-p65/p65 p-PI3K/PI3K
PBS 3 0.32 ± 0.03 0.81 ± 0.14 1.32 ± 0.06
MSC-Exo 3 0.49 ± 0.04a 0.51 ± 0.07a 1.41 ± 0.05
MSC-ExoPOSTN 3 0.81 ± 0.06ab 1.15 ± 0.10ab 1.42 ± 0.04
F值 57.970 26.360 2.693
P值 ＜ 0.001 ＜ 0.001 0.146
1
Maki H， Hasegawa K.Advances in the surgical treatment of liver cancer［J］.Biosci Trends， 2022， 16（3）：178-188.
2
Vargas PA， Dar N， de Souza Martins Fernandes E， et al.Surgical approach to achieve R0 resections in primary and metastatic liver tumors： a literature review［J］.J Gastrointest Oncol， 2023， 14（4）：1949-1963.
3
Søreide JA， Deshpande R.Post hepatectomy liver failure （PHLF）-recent advances in prevention and clinical management［J］.Eur J Surg Oncol， 2021， 47（2）：216-224.
4
Wu Y， Li N， Shu X， et al.Biomechanics in liver regeneration after partial hepatectomy［J］.Front Bioeng Biotechnol， 2023， 11：1165651.doi： 10.3389/fbioe.2023.1165651.
5
Cai J， Tang D， Hao X， et al.Mesenchymal stem cell-derived exosome alleviates sepsis- associated acute liver injury by suppressing MALAT1 through microRNA-26a-5p： an innovative immunopharmacological intervention and therapeutic approach for sepsis［J］.Front Immunol，2023， 14：1157793.doi： 10.3389/fimmu.2023.1157793.
6
Yang B， Duan W， Wei L， et al.Bone marrow mesenchymal stem cell-derived hepatocyte-like cell exosomes reduce hepatic ischemia/reperfusion injury by enhancing autophagy［J］.Stem Cells Dev， 2020，29（6）：372-379.
7
Song XJ， Zhang L， Li Q， et al.hUCB-MSC derived exosomal miR- 124 promotes rat liver regeneration after partial hepatectomy via downregulating Foxg1［J］.Life Sci， 2021， 265：118821.doi： 10.1016/j.lfs.2020.118821.
8
Sun C， Shi C cui， Duan XY， et al.Exosomal microRNA-618 derived from mesenchymal stem cells attenuate the progression of hepatic fibrosis by targeting Smad4［J］.Bioengineered， 2022， 13（3）：5915-5927.
9
Cai J， Wang J， Jiang C， et al.Combined inhibition of surface CD51 and γ-secretase-mediated CD51 cleavage improves therapeutic efficacy in experimental metastatic hepatocellular carcinoma［J］.J Hepatol， 2023，79（6）：1418-1434.
10
Smid JK， Faulkes S， Rudnicki MA.Periostin induces pancreatic regeneration［J］.Endocrinology， 2015， 156（3）：824-836.
11
Shih CH， Lacagnina M， Leuer-Bisciotti K， et al.Astroglial-derived periostin promotes axonal regeneration after spinal cord injury［J］.J Neurosci， 2014， 34（7）：2438-2443.
12
Ma SM， Chen LX， Lin YF， et al.Periostin promotes neural stem cell proliferation and differentiation following hypoxic-ischemic injury［J］.PLoS One， 2015， 10（4）：e0123585.doi： 10.1371/journal.pone.0123585.
13
Wu T， Huang J， Wu S， et al.Deficiency of periostin impairs liver regeneration in mice after partial hepatectomy［J］.Matrix Biol， 2018，66：81-92.
14
Mitchell C， Willenbring H.A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice［J］.Nat Protoc， 2008， 3（7）：1167-1170.
15
Zhang J， Lu T， Xiao J， et al.MSC-derived extracellular vesicles as nanotherapeutics for promoting aged liver regeneration［J］.J Control Release， 2023， 356：402-415.
16
Zhao Y， Ye W， Wang YD， et al.HGF/c-Met： a key promoter in liver regeneration［J］.Front Pharmacol， 2022， 13：808855.doi： 10.3389/fphar.2022.808855.
17
Ding Y， Luo Q， Que H， et al.Mesenchymal stem cell-derived exosomes： a promising therapeutic agent for the treatment of liver diseases［J］.Int J Mol Sci， 2022， 23（18）：10972.doi： 10.3390/ijms231810972.
18
Ma J， Zhao Y， Sun L， et al.Exosomes derived from akt-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells improve cardiac regeneration and promote angiogenesis via activating platelet-derived growth factor D［J］.Stem Cells Transl Med， 2017， 6（1）：51-59.
19
Klaas M， Kangur T， Viil J， et al.The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue［J］.Sci Rep， 2016， 6：27398.doi： 10.1038/srep27398.
20
Cordero-Espinoza L， Huch M.The balancing act of the liver： tissue regeneration versus fibrosis［J］.J Clin Invest， 2018， 128（1）：85-96.
21
Williams MJ， Clouston AD， Forbes SJ.Links between hepatic fibrosis，ductular reaction， and progenitor cell expansion［J］.Gastroenterology，2014， 146（2）：349-356.
22
Allu I， Sahi AK， Koppadi M， et al.Decellularization techniques for tissue engineering： towards replicating native extracellular matrix architecture in liver regeneration［J］.J Funct Biomater， 2023，14（10）：518.doi： 10.3390/jfb14100518.
23
Massey VL， Dolin CE， Poole LG， et al.The hepatic "matrisome"responds dynamically to injury： characterization of transitional changes to the extracellular matrix in mice［J］.Hepatology， 2017， 65（3）：969-982.
24
Kumar P， Smith T， Raeman R， et al.Periostin promotes liver fibrogenesis by activating lysyl oxidase in hepatic stellate cells［J］.J Biol Chem， 2018， 293（33）：12781-12792.
25
Xiao Z， Wang X， Wang A.Periostin induces chemoresistance in colon cancer cells through activation of the PI3K/Akt/survivin pathway［J］.Biotechnology and Applied Biochemistry， 2015， 62（3）：401-406.
26
Lambert AW， Wong CK， Ozturk S， et al.Tumor cell-derived periostin regulates cytokines that maintain breast cancer stem cells［J］.Mol Cancer Res， 2016， 14（1）：103-113.
[1] 黄晓芳, 刘澍雨, 黄子荣, 胡艳, 梁家敏, 朱伟民. 软骨细胞来源外泌体对于软骨损伤修复的研究进展[J/OL]. 中华关节外科杂志(电子版), 2024, 18(06): 751-758.
[2] 张晓波, 巴特, 黄瑞娟, 王宏宇. 间充质干细胞外泌体改善急性肺损伤机制的研究进展[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2025, 20(01): 81-85.
[3] 曾繁润, 林永勇, 王君. 间充质干细胞外泌体促进创面血管新生机制的研究进展[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2025, 20(01): 86-89.
[4] 宋勤琴, 李双汝, 李林, 杜鹃, 刘继松. 间充质干细胞源性外泌体在改善病理性瘢痕中作用的研究进展[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2024, 19(06): 550-553.
[5] 刘昌玲, 张金丽, 张志, 李孝建, 汤文彬, 胡逸萍, 陈宾, 谢晓娜. 负载人脂肪干细胞外泌体的甲基丙烯酰化明胶水凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖和迁移的影响[J/OL]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2024, 19(06): 517-525.
[6] 刘咏博, 郭佳. 外泌体在前列腺癌细胞免疫逃逸中的研究进展[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(02): 140-145.
[7] 杨健, 杨璐. 体液外泌体在前列腺癌诊断中的应用前景[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(02): 146-151.
[8] 陈用来, 谌莉, 李勇, 傅仕艳, 冉永红, 赵雅贞, 郝玉徽. 放射性肺纤维化的研究近展[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2024, 17(06): 1042-1047.
[9] 卓馨怡, 祝宇翀, 刘军权, 廖雨琴. 间充质干细胞制备的纳米囊泡在疾病治疗中的研究进展[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2025, 15(01): 57-62.
[10] 王大伟, 陆雅斐, 皇甫少华, 陈玉婷, 陈澳, 江滨. 间充质干细胞通过调控免疫机制促进创面愈合的研究进展[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(06): 361-366.
[11] 傅红兴, 王植楷, 谢贵林, 蔡娟娟, 杨威, 严盛. 间充质干细胞促进胰岛移植效果的研究进展[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(06): 351-360.
[12] 蒙柄成, 朱海, 任洪冰, 毛伟民, 韦德令, 徐邦浩, 王继龙, 金宗睿, 蓝祝晶, 黄柯豫, 卢婷婷, 张灵, 郭雅, 文张. IGF-1 介导FOXO 信号通路在大鼠ALPPS 术后肝再生中的作用[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 118-125.
[13] 袁雨涵, 杨盛力. 体液和组织蛋白质组学分析在肝癌早期分子诊断中的研究进展[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2024, 13(06): 883-888.
[14] 吴雪云, 胡小军, 范应方. 肝切除术中剩余肝再生能力的评估与预测[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2024, 13(06): 894-897.
[15] 张可颖, 冀雨薇, 付章宁, 张益帆, 王晓晨, 杨滟, 陈香美, 蔡广研, 洪权. 人参皂苷Rb1 预处理间充质干细胞的转录组分析及急性肾损伤治疗关键基因挖掘[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2025, 14(01): 26-33.
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