桔梗多糖通过LINC01554影响肝癌细胞增殖、凋亡的分子机制研究

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2022.01.003

目的

探讨桔梗多糖对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。

方法

采用低、中、高剂量（20、40、60 μg/mL）的桔梗多糖处理肝癌细胞Huh-7，二甲基亚砜（DMSO）处理的Huh-7细胞作为对照；pcDNA、pcDNA-LINC01554分别转染入Huh-7细胞；si-NC、si-LINC01554分别转染Huh-7细胞后加入桔梗多糖处理；采用MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-qPCR法检测LINC01554的表达量。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。

结果

与对照比较，低、中、高剂量的桔梗多糖干预后细胞活力（1.26±0.09比1.05±0.06，0.77±0.05，0.47±0.03）下降及集落形成数[（117.00±4.55）比（99.67±3.86），（71.67±2.87），（54.67±2.05）个]减少，凋亡率[ （8.24± 0.49）﹪比（13.47±0.72）﹪，（18.20±0.84）﹪，（22.52±1.12）﹪]及LINC01554表达水平（1.00± 0.00比1.35±0.05，1.90±0.06，3.38±0.09）均升高（P均< 0.05），且呈浓度依赖性；与转染pcDNA比较，转染pcDNA-LINC01554的细胞活力（1.24±0.08比0.56±0.03）降低，集落形成数[（116.67±4.19）比64.33±2.49）个]减少，凋亡率[（8.13±0.60）﹪比（20.45±0.97）﹪]升高（P均< 0.05）；与转染si-NC加桔梗多糖处理比较，si-LINC01554加桔梗多糖处理的细胞活力（0.48±0.03比1.12±0.06）升高，集落形成数[（55.00±2.16）比（107.67±3.40）个]增多，凋亡率[（22.51±1.10）﹪比（10.52±0.49）﹪]降低（P均< 0.05）。

结论

桔梗多糖可通过上调LINC01554的表达减弱肝癌细胞增殖及克隆形成能力，并诱导细胞凋亡。

关键词: 桔梗多糖, 长链非编码RNA, 肝癌, 增殖, 凋亡

Objective

To explore the effects and mechanisms of polysaccharides of radix platycodonis on the proliferation and apoptosis of liver cancer cells.

Methods

Liver cancer cells Huh-7 were treated with low, medium and high dose (20, 40, 60 μg/mL) polysaccharides of radix platycodonis respectively. DMSO-treated Huh-7 cells were served as control. In addition, pcDNA and pcDNA-LINC01554 were transfected into Huh-7 cells. si-NC and si-LINC01554 were transfected into Huh-7 cells respectively and then treated with polysaccharides of radix. Cell proliferation and clone formation ability were detected by MTT experiment and plate clone formation experiment. Apoptosis rate was detected by Flow cytometry. The expression of LINC01554 was detected by RT-qPCR. The comparison between the two groups of data was performed by t test, and the comparison of multiple groups was performed by one-way analysis of variance.

Results

Compared with the control, the cell viability (1.26±0.09 vs 1.05±0.06, 0.77±0.05, 0.47± 0.03) and the number of colonies formed (117.00±4.55 vs 99.67±3.86, 71.67±2.87, 54.67±2.05) were decreased in low, medium and high dose polysaccharides of radix platycodonis treated cells in a dose-dependent manner, while the apoptosis rate [ (8.24±0.49) ﹪ vs (13.47±0.72) ﹪, (18.20±0.84) ﹪, 22.52±1.12) ﹪] and the expression level of LINC01554 (1.00±0.00 vs 1.35±0.05, 1.90±0.06, 3.38±0.09) were increased significantly in a dose-dependent manner (all P < 0.05) . Compared with the pcDNA, cell viability (1.24±0.08 vs 0.56±0.03) and the colony formation number (116.67±4.19 vs 64.33±2.49) were decreased in pcDNA-LINC01554 transfected cells, while the apoptosis rate was increased [ (8.13±0.60) ﹪vs (20.45±0.97) ﹪] (all P < 0.05) . Compared with the polysaccharides of radix platycodonis+si-NC, the cell viability (0.48±0.03 vs 1.12±0.06) and the number of colonies formed (55.00±2.16 vs 107.67±3.40) were increased in the polysaccharides of radix platycodonis+si-LINC01554 treated cells, while the apoptosis rate was decreased [ (22.51±1.10) ﹪vs 10.52±0.49) ﹪] ( all P < 0.05) .

Conclusion

Polysaccharides of radix platycodonis could reduce the proliferation and cloning ability of liver cancer cells and induce apoptosis by up-regulating the expression of LINC01554.

Key words: Polysaccharides of radix platycodonis, Long noncoding RNA, Liver cancer, Proliferation, Apoptosis

表1 引物序列信息

基因	序列（5'→3'）	预期产物扩增长度（bp）
LINC01554	上游GGAGGTCGGTTGATGAGCAGT	243
	下游GTCAAGCCTGTGTGTCATCGTT
GAPDH	上游CAGGAGGCATTGCTGATGAT	293
	下游GAAGGCTGGGGCTCATTT

表1 引物序列信息

基因	序列（5'→3'）	预期产物扩增长度（bp）
LINC01554	上游GGAGGTCGGTTGATGAGCAGT	243
	下游GTCAAGCCTGTGTGTCATCGTT
GAPDH	上游CAGGAGGCATTGCTGATGAT	293
	下游GAAGGCTGGGGCTCATTT

图1 流式细胞术检测桔梗多糖诱导肝癌细胞凋亡注：a图为对照；b图为20 μg/mL桔梗多糖干预；c图为40 μg/mL桔梗多糖干预；d图为60 μg/mL桔梗多糖干预

图2 Western blot检测桔梗多糖诱导Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白表达

表2 桔梗多糖对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
对照	3	1.26±0.09	117.00±4.55	8.24±0.49	0.13±0.01	0.74±0.06
20 μg/mL桔梗多糖	3	1.05±0.06^a	99.67±3.86^a	13.47±0.72^a	0.27±0.02^a	0.53±0.05^a
40 μg/mL桔梗多糖	3	0.77±0.05^ab	71.67±2.87^ab	18.20±0.84^ab	0.44±0.04^ab	0.35±0.03^ab
60 μg/mL桔梗多糖	3	0.47±0.03^abc	54.67±2.05^abc	22.52±1.12^abc	0.68±0.06^abc	0.14±0.01^abc
F值		93.583	194.377	166.787	118.035	110.535
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

表2 桔梗多糖对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
对照	3	1.26±0.09	117.00±4.55	8.24±0.49	0.13±0.01	0.74±0.06
20 μg/mL桔梗多糖	3	1.05±0.06^a	99.67±3.86^a	13.47±0.72^a	0.27±0.02^a	0.53±0.05^a
40 μg/mL桔梗多糖	3	0.77±0.05^ab	71.67±2.87^ab	18.20±0.84^ab	0.44±0.04^ab	0.35±0.03^ab
60 μg/mL桔梗多糖	3	0.47±0.03^abc	54.67±2.05^abc	22.52±1.12^abc	0.68±0.06^abc	0.14±0.01^abc
F值		93.583	194.377	166.787	118.035	110.535
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

表3 桔梗多糖对细胞中LINC01554表达的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554
对照	3	1.00±0.00
20 μg/mL桔梗多糖	3	1.35±0.05^a
40 μg/mL桔梗多糖	3	1.90±0.06^ab
60 μg/mL桔梗多糖	3	3.38±0.09^abc
F值		930.331
P值		< 0.001

表3 桔梗多糖对细胞中LINC01554表达的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554
对照	3	1.00±0.00
20 μg/mL桔梗多糖	3	1.35±0.05^a
40 μg/mL桔梗多糖	3	1.90±0.06^ab
60 μg/mL桔梗多糖	3	3.38±0.09^abc
F值		930.331
P值		< 0.001

图3 过表达LINC0155诱导Bax蛋白表达抑制Bcl-2蛋白表达注：a ~ b图为流式细胞术检测转染pcDNA和pcDNA-LINC01554后肝癌细胞凋亡；c图为Western blot检测细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平

表4 LINC01554对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
pcDNA	3	1.00±0.00	1.24±0.08	116.67±4.19	8.13±0.60	0.13±0.02	0.74±0.07
pcDNA-LINC01554	3	2.96±0.08	0.56±0.03	64.33±2.49	20.45±0.97	0.57±0.04	0.22±0.02
t值		42.435	13.785	18.600	18.709	17.041	12.372
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

表4 LINC01554对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
pcDNA	3	1.00±0.00	1.24±0.08	116.67±4.19	8.13±0.60	0.13±0.02	0.74±0.07
pcDNA-LINC01554	3	2.96±0.08	0.56±0.03	64.33±2.49	20.45±0.97	0.57±0.04	0.22±0.02
t值		42.435	13.785	18.600	18.709	17.041	12.372
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

图4 抑制LINC01554可逆转桔梗多糖对细胞中Bax蛋白表达抑制Bcl-2蛋白表达的作用注：a ~ b图为流式细胞术检测桔梗多糖+si-NC和桔梗多糖+si-LINC01554逆转肝癌细胞凋亡；c图为Western blot检测细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平

表5 抑制LINC01554可逆转桔梗多糖对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
桔梗多糖+si-NC	3	3.36±0.10	0.48±0.03	55.00±2.16	22.51±1.10	0.70±0.06	0.14±0.01
桔梗多糖+si-LINC01554	3	1.14±0.06	1.12±0.06	107.67±3.40	10.52±0.49	0.20±0.02	0.66±0.05
t值		32.972	16.525	22.648	17.246	13.693	17.664
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

表5 抑制LINC01554可逆转桔梗多糖对细胞增殖和凋亡的影响（ ± s）

分组	实验次数	LINC01554	细胞活力	集落形成数（个）	凋亡率（﹪）	Bax	Bcl-2
桔梗多糖+si-NC	3	3.36±0.10	0.48±0.03	55.00±2.16	22.51±1.10	0.70±0.06	0.14±0.01
桔梗多糖+si-LINC01554	3	1.14±0.06	1.12±0.06	107.67±3.40	10.52±0.49	0.20±0.02	0.66±0.05
t值		32.972	16.525	22.648	17.246	13.693	17.664
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

1	周孟，廖祥明，王珊, 等. 槲皮素抑制人肝癌细胞HepG2的体内外活性研究[J]. 安徽医药, 2019, 23(11):2136-2141.
2	韩康，包永睿，王帅, 等. 中药地榆对肝癌HepG2细胞的抑制作用及机制研究[J]. 辽宁中医药大学学报, 2019, 21(5):30-32.
3	展凡，王玉涵，王萌, 等. 新藤黄酸抑制人肝癌细胞BEL-7402自噬作用研究[J]. 安徽中医药大学学报, 2020, 39(3):46-50.
4	He JQ, Zheng MX, Ying HZ, et al. PRP1, a heteropolysaccharide from platycodonis radix, induced apoptosis of HepG2 cells via regulating miR-21-mediated PI3K/AKT pathway[J]. Int J Biol Macromol, 2020, 158(1):542-551.
5	Zheng YL, Li L, Jia YX, et al. LINC01554-mediated glucose metabolism reprogramming suppresses tumorigenicity in hepatocellular carcinoma via downregulating PKM2 expression and inhibiting Akt/mTOR signaling pathway[J]. Theranostics, 2019, 9(3):796-810.
6	陆文总，杨亚丽，贾光锋, 等. 桔梗多糖对U-14宫颈癌抗肿瘤作用的研究[J]. 西北药学杂志, 2013, 28(1):43-45.
7	Sukowati CHC, Anfuso B, Fiore E, et al. Hyaluronic acid inhibition by 4-methylumbelliferone reduces the expression of cancer stem cells markers during hepatocarcinogenesis[J]. Sci Rep, 2019, 9(1):4026-4036.
8	Feng B, Zhu Y, Sun C, et al. Basil polysaccharide inhibits hypoxia-induced hepatocellular carcinoma metastasis and progression through suppression of HIF-1alpha-mediated epithelial-mesenchymal transition[J]. Int J Biol Macromol, 2019, 137(1):32-44.
9	顾程远，陈秋利，李海涛. 桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[J]. 南京中医药大学学报, 2017, 33(3):268-272.
10	姚欢欢，陈吉，李岚. 桔梗多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响[J]. 中国中医药科技, 2020, 27(5):701-707.
11	Dasgupta A, Dey D, Ghosh D, et al. Astrakurkurone, a sesquiterpenoid from wild edible mushroom, targets liver cancer cells by modulating Bcl-2 family proteins[J]. IUBMB Life, 2019, 71(7):992-1002.
12	Ding Y, Sun Z, Zhang S, et al. Down-regulation of long non-coding RNA LINC01554 in hepatocellular cancer and its clinical significance[J]. J Cancer, 2020, 11(11):3369-3374.
13	Li L, Huang K, Lu Z, et al. Bioinformatics analysis of LINC01554 and its co-expressed genes in hepatocellular carcinoma[J]. Oncol Rep, 2020, 44(5):2185-2197.

[1]	刘伟, 牛云峰, 安杰. LINC01232 通过miR-516a-5p/BCL9 轴促进三阴性乳腺癌的恶性进展[J/OL]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2024, 18(06): 330-338.
[2]	唐梅, 周丽, 牛岑月, 周小童, 王倩. ICG荧光导航的腹腔镜肝切除术临床意义[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2024, 18(06): 655-658.
[3]	唐亦骁, 陈峻, 连正星, 胡海涛, 鲁迪, 徐骁, 卫强. 白果内酯对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用研究[J/OL]. 中华移植杂志(电子版), 2024, 18(05): 278-282.
[4]	胡宁宁, 赵延荣, 王栋, 王胜亮, 郭源. FMNL3与肝细胞癌肝移植受者预后的相关性研究[J/OL]. 中华移植杂志(电子版), 2024, 18(05): 283-288.
[5]	祝炜安, 林华慧, 吴建杰, 黄炯煅, 吴婷婷, 赖文杰. RDM1通过CDK4促进前列腺癌细胞进展的研究[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(06): 618-625.
[6]	郑俊, 吴杰英, 谭海波, 郑安全, 李腾成. EGFR-MEK-TZ三联合分子的构建及其对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(05): 503-508.
[7]	王飞, 陈政, 余德才, 曹亚娟. 原发性肝癌合并门静脉高压症的微创手术治疗[J/OL]. 中华腔镜外科杂志(电子版), 2024, 17(05): 306-310.
[8]	张敏, 朱建华, 缪雅芳, 郭锦荣. 菝葜皂苷元对肝癌HepG2细胞抑制作用的机制研究[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(06): 328-335.
[9]	黄程鑫, 陈莉, 刘伊楚, 王水良, 赖晓凤. OPA1 在乳腺癌组织的表达特征及在ER阳性乳腺癌细胞中的生物学功能研究[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(05): 275-284.
[10]	袁雨涵, 杨盛力. 体液和组织蛋白质组学分析在肝癌早期分子诊断中的研究进展[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2024, 13(06): 883-888.
[11]	吴警, 吐尔洪江·吐逊, 温浩. 肝切除术前肝功能评估新进展[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2024, 13(06): 889-893.
[12]	王国强, 张纲, 唐建坡, 张玉国, 杨永江. LINC00839 调节miR-17-5p/WEE1 轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响[J/OL]. 中华消化病与影像杂志(电子版), 2024, 14(06): 491-499.
[13]	广东省护士协会介入护士分会, 广东省医师协会介入医师分会. 原发性肝癌低血糖患者护理规范管理专家共识[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(08): 709-714.
[14]	韦巧玲, 黄妍, 赵昌, 宋庆峰, 陈祖毅, 黄莹, 蒙嫦, 黄靖. 肝癌微波消融术后中重度疼痛风险预测列线图模型构建及验证[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(08): 715-721.
[15]	蔡晓雯, 李慧景, 丘婕, 杨翼帆, 吴素贤, 林玉彤, 何秋娜. 肝癌患者肝动脉化疗栓塞术后疼痛风险预测模型的构建及验证[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(08): 722-728.

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Mechanisms of polysaccharides of radix platycodonis in the proliferation and apoptosis of liver cancer cells via LINC01554

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