切换至 "中华医学电子期刊资源库"
高级检索
中华细胞与干细胞杂志(电子版)

中华细胞与干细胞杂志(电子版) ›› 2020, Vol. 10 ›› Issue (03) : 146 -154. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2020.03.003

所属专题： 文献；

论著

lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
张敬1, 董杰1, 王秋桔1, 崔允巍1, 张辉2,†()   
  1. 1. 053000　衡水，河北省衡水市妇幼保健院妇产科
    2. 050019　石家庄，河北医科大学第四医院妇产科
  • 收稿日期:2020-02-13 出版日期:2020-06-01
  • 通信作者: 张辉
  • 基金资助:
    河北省青年科技课题(20171228)

Effects of lncRNA RPL34-AS1 on the proliferation and apoptosis of ovarian cancer cells by targeted regulation of miR-575 expression

Jing Zhang1, Jie Dong1, Qiuju Wang1, Yunwei Cui1, Hui Zhang2,†()   

  1. 1. Department of Obstetrics and Gynecology, Maternal and Child Health Hospital of Hengshui City, Hebei Province, Hengshui 053000, China
    2. Department of Obstetrics and Gynecology, the Fourth Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050019, China
  • Received:2020-02-13 Published:2020-06-01
  • Corresponding author: Hui Zhang
  • About author:
    Corresponding author: Zhang Hui, Email:
全文 ( ) 下载PDF ( ) 导出引用
引用本文：

张敬, 董杰, 王秋桔, 崔允巍, 张辉. lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响[J]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2020, 10(03): 146-154.

Jing Zhang, Jie Dong, Qiuju Wang, Yunwei Cui, Hui Zhang. Effects of lncRNA RPL34-AS1 on the proliferation and apoptosis of ovarian cancer cells by targeted regulation of miR-575 expression[J]. Chinese Journal of Cell and Stem Cell(Electronic Edition), 2020, 10(03): 146-154.

目的

探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。

方法

取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h，将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中，分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-575组；将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中，记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平；双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系；四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （p21）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。

结果

与癌旁组织相比，卵巢癌组织中RPL34-AS1表达水平降低（1.00±0.08比0.47±0.05），miR-575表达水平升高（1.01±0.07比3.12±0.28）（P < 0.05）。转染si-RPL34-AS1后，细胞活性升高（48 h：0.68±0.06比0.55±0.05；72 h：0.99±0.08比0.71±0.06），G1期细胞所占比例降低（13.42±1.38比32.15±2.11），S期细胞所占比例升高（53.75±5.22比34.69±3.41），细胞凋亡率降低（4.31±0.42比9.25±0.91），CyclinD1、Bcl-2表达水平升高（0.92±0.08比0.71±0.07；0.86±0.07比0.61±0.06），p21、Bax表达水平降低（0.13±0.02比0.29±0.03；0.19±0.02比0.31±0.03） （P均< 0.05）。RPL34-AS1靶向调控miR-575，过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性，阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。

结论

过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖，促进细胞凋亡，其机制可能与下调miR-575有关。

关键词: RPL34-AS1, MiR-575, 卵巢癌, 增殖, 凋亡
Objective

To investigate the effect of RPL34-AS1 on the proliferation and apoptosis of ovarian cancer cells and whether its mechanism is related to miR-575.

Method

SKOV3 cells in logarithmic growth phase were synchronized with serum-free mediumfor 12 h and pcDNA, pcDNA-RPL34-AS1, si-NC, si-NC, si-RPL34-AS1, si-RPL34-AS1, anti-miR-NC, anti-anti-miR-NC, anti-miR-575 were transfected into SKOV3 cells, respectively labeled as pcDNA group, pcDNA-RPL34-AS1 group, si-NC group, si-NC group, si-RPL34-AS1 group, si-RPL34-AS1 group, anti-miR-NC group, anti-miR-NC group, anti-miR-575 group; PcDNA-RPL34-AS1 was co-transfected into SKOV3 cells with miR-NC and miR-575, respectively, labeled as pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC group, pcDNA-RPL34-AS1+miR-575 group. Real-time fluorescent quantitative PCR (RT-qPCR) was used to detect the expression level of RPL34-AS1 and miR-575 in clinical tissue specimens and cells of each group after transfection; dual luciferase reporter assay was used to detect the targeting relationship between RPL34-AS1 and miR-575; tetramethylazozolium salt colorimetric method (MTT) was used to detect cell viability; flow cytometry was used to detect apoptosis; Western Blot was used to detect expression of Cyclin D1, Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A (p21) , B-cell lymphoma/leukemia-2 (Bcl-2) , Bcl-2 related X protein (Bax) proteins.The comparison between the two groups was performed using the independent sample t test, and the comparison between multiple groups was performed using the one-way analysis of variance; LSD-t test was used for pairwise comparison between groups.

Results

Compared with adjacent tissues, the expression level of RPL34-AS1 was decreased in ovarian cancer tissues, the expression level ofmiR-575 was increased (1.01±0.07 vs 3.12±0.28) (P < 0.05) . After transfection with si-RPL34-AS1, cell viability was increased (48 h: 0.68±0.06 vs 0.55±0.05; 72 h: 0.99±0.08 vs 0.71±0.06) , and the proportion of G1 phase cells was decreased (13.42±1.38 vs 32.15±2.11) , the proportion of S-phase cells was increased (53.75±5.22 vs 34.69±3.41) , the apoptosis rate was decreased (4.31±0.42 vs 9.25±0.91) , and the expression level of CyclinD1 and Bcl-2 were increased (0.92±0.08 vs 0.71±0.07; 0.86±0.07 vs 0.61±0.06) , the expression level of p21 and Bax were decreased (0.13±0.02 vs 0.29±0.03; 0.19±0.02 vs 0.31±0.03) (all P < 0.05) . RPL34-AS1 targets and regulates miR-575. Overexpression of RPL34-AS1 or inhibition of miR-575 can inhibit cell activity, block the cell cycle and promote apoptosis. MiR-575 overexpression reversed RPL34-AS1 overexpression effect on ovarian cancer SKOV3 cell proliferation inhibition as well as its apoptosis promotion.

Conclusion

Overexpression of RPL34-AS1 can inhibit the proliferation of ovarian cancer SKOV3 cells and promote cell apoptosis, which may be related to the down-regulation of miR-575.

Key words: RPL34-AS1, MiR-575, Ovarian cancer, Proliferation, Apoptosis
表1 引物序列信息
基因 引物序列（5' - 3'） 预期扩增长度（bp）
RPL34-AS1 上游TGCTTTCCCTCAGCACTCTT 244
? 下游ACAGGCGAGTGAGAGACGAT ?
GAPDH 上游GATACACGGAGCACCAGGTT 158
? 下游CAGGTCACATACACGGTTGC ?
miR-575 上游AATTCAGCCCTGCCACTGGCTTAT 94
? 下游GAGTTGAGTGGCACACTCTGCT ?
U6 上游CTCGCTTCGGCAGCACA 96
? 下游ACGCTTCACGAATTTGCGTC ?
图1 lncRNA RPL34-AS1和miR-575在卵巢癌组织中的表达
图2 RPL34-AS1的序列中含有与miR-575互补的核苷酸序
表2 miR-NC组和miR-575组荧光素酶相对活性（±s，n = 3）
分组 WT-RPL34-AS1 MUT-RPL34-AS1
miR-NC组 0.99±0.08 0.97±0.09
miR-575组 0.36±0.04 0.98±0.07
t值 21.130 0.263
P值 <0.001 0.795
图3 lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
表3 lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响（±s，n = 3）
分组 RPL34-AS1 OD值（490 nm） 细胞周期（﹪） 凋亡率（﹪）
24 h 48 h 72 h G1 S M
对照组 1.00±0.08 0.36±0.03 0.57±0.05 0.76±0.06 31.65±3.11 33.58±3.74 34.77±3.71 7.98±0.71
pcDNA 1.00±0.09 0.35±0.03 0.54±0.05 0.73±0.07 30.54±3.03 35.69±3.54 33.77±3.47 8.36±0.84
pcDNA-RPL34-AS1 2.93±0.28a 0.31±0.03ab 0.37±0.04ab 0.51±0.05ab 54.12±5.28ab 10.74±2.02ab 35.14±3.45 20.11±2.01ab
F值 360.862 7.000 47.591 45.736 102.280 168.917 0.360 244.590
P值 <0.001 0.004 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.702 <0.001
表4 lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响（±s，n = 3）
分组 CyclinD1蛋白 p21蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白
对照组 0.81±0.08 0.23±0.03 0.69±0.06 0.20±0.02
pcDNA 0.79±0.07 0.25±0.03 0.68±0.06 0.22±0.03
pcDNA-RPL34-AS1 0.33±0.03ab 0.66±0.06ab 0.29±0.03ab 0.61±0.05ab
F值 163.180 294.500 173.444 379.658
P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
图4 抑制RPL34-AS1表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
表5 抑制si-RPL34-AS1表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖、周期和凋亡的影响（±s，n = 3）
分组 RPL34-AS1 OD值（490 nm） 细胞周期（﹪） 凋亡率（﹪）
24h 48h 72h G1 S M
对照组 1.00±0.09 0.37±0.03 0.56±0.05 0.74±0.07 30.65±3.11 34.28±3.51 35.07±3.66 8.98±0.98
si-NC 1.00±0.06 0.36±0.03 0.55±0.05 0.71±0.06 32.15±2.11 34.69±3.41 33.16±3.24 9.25±0.91
si-RPL34-AS1 0.51±0.05ab 0.39±0.03 0.68±0.06ab 0.99±0.08ab 13.42±1.38ab 53.75±5.22ab 32.83±3.57 4.31±0.42ab
F值 152.176 2.333 16.430 42.826 182.468 65.266 1.078 106.003
P值 <0.001 0.119 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.356 <0.001
表6 抑制si-RPL34-AS1表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响（±s，n = 3）
分组 CyclinD1蛋白 p21蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白
对照组 0.68±0.06 0.31±0.03 0.59±0.05 0.33±0.03
si-NC 0.71±0.07 0.29±0.03 0.61±0.06 0.31±0.03
si-RPL34-AS1 0.92±0.08ab 0.13±0.02ab 0.86±0.07ab 0.19±0.02ab
F值 30.987 119.455 55.555 70.364
P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
图5 抑制miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响
表7 抑制miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖、周期和凋亡的影响（±s，n = 3）
分组 miR-575 OD值（490 nm） 细胞周期（﹪） 凋亡率（﹪）
24h 48h 72h G1 S M
对照组 1.00±0.06 0.36±0.04 0.57±0.05 0.77±0.06 31.21±3.12 35.69±3.44 33.10±3.54 6.98±0.71
anti-miR-NC 1.01±0.08 0.34±0.03 0.56±0.05 0.74±0.07 32.14±3.12 34.69±3.12 33.65±3.12 7.45±0.74
anti-miR-575 0.47±0.04ab 0.33±0.03 0.41±0.04ab 0.57±0.05ab 50.36±5.11ab 17.50±1.64ab 32.14±3.31 17.69±1.76ab
F值 222.129 1.853 32.864 28.555 69.064 113.723 0.449 238.359
P值 <0.001 0.179 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.644 <0.001
表8 抑制miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响（±s，n = 3）
分组 CyclinD1蛋白 p21蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白
对照组 0.79±0.07 0.24±0.03 0.68±0.06 0.20±0.02
anti-miR-NC 0.77±0.07 0.26±0.03 0.69±0.06 0.21±0.03
anti-miR-575 0.38±0.03ab 0.61±0.06ab 0.33±0.03ab 0.57±0.05ab
F值 134.832 216.500 140.111 315.711
P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
图6 miR-575过表达逆转lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞和凋亡的作用
表9 miR-575过表达逆转了lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖、周期和凋亡的作用（±s，n = 3）
分组 miR-575 OD值（490 nm） 细胞周期（﹪） 凋亡率（﹪）
24h 48h 72h G1 S M
pcDNA 1.00±0.09 0.36±0.03 0.58±0.05 0.76±0.07 31.65±3.11 33.58±3.41 34.77±3.42 7.98±0.77
pcDNA-RPL34-AS1 0.49±0.04a 0.32±0.03a 0.38±0.03a 0.52±0.05a 53.12±5.22a 11.23±1.28a 35.65±3.14 20.14±2.02a
pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC 0.47±0.05 0.30±0.03 0.36±0.04 0.49±0.04 55.69±5.13 10.21±1.20 34.10±3.46 21.65±2.11
pcDNA-RPL34-AS1+miR-575 0.88±0.07b 0.35±0.03b 0.52±0.05b 0.69±0.06b 40.35±4.11b 28.14±2.54b 31.54±3.26 12.06±1.22b
F值 153.684 7.583 55.040 48.857 56.892 238.197 2.548 144.410
P值 <0.001 0.006 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.073 <0.001
表10 miR-575过表达逆转了lncRNA RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的作用（±s，n = 3）
分组 凋亡率（﹪） CyclinD1蛋白 p21蛋白 Bcl-2蛋白 Bax蛋白
pcDNA 7.98±0.77 0.78±0.07 0.24±0.03 0.67±0.06 0.22±0.03
pcDNA-RPL34-AS1 20.14±2.02a 0.35±0.03a 0.67±0.06a 0.28±0.03a 0.63±0.05a
pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC 21.65±2.11 0.34±0.03 0.68±0.07 0.27±0.03 0.60±0.06
pcDNA-RPL34-AS1+miR-575 12.06±1.22b 0.67±0.06b 0.35±0.04b 0.56±0.05b 0.33±0.03b
F值 144.410 175.339 164.181 184.860 185.468
P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
9
郭坤蕾, 张国楠. 卵巢癌靶向治疗的研究现状[J]. 肿瘤预防与治疗, 2018, 31(6):75-80.
10
Zhao J, Liu Y, Zhang W, et al. Long non-coding RNA Linc00152 is involved in cell cycle arrest, apoptosis, epithelial to mesenchymal transition, cell migration and invasion in gastric cancer[J]. Cell Cycle, 2015, 14(19):3112-3123.
11
Ji L, Fan X, Zhou F, et al. lncRNA RPL34-AS1 inhibits cell proliferation and invasion while promoting apoptosis by competitively binding miR-3663-3p/RGS4 in papillary thyroid cancer[J]. J Cell Physiol, 2020, 235(4):3669-3678.
12
王明阳, 王光磊, 陈新亮, 等. MicroRNA的生物学功能及其与肿瘤诊断和治疗的研究进展[J]. 动物医学进展, 2018, 39(1):95-98.
13
Gray A N, Cui T, Geurts M, et al. Elucidation of the role of miR-575 on tumorigenesis in glioblastoma[J]. Cancer Res, 2017, 77(13):3423.
14
Zhao X, Yi Y, Meng C, et al. MiRNA-575 suppresses angiogenesis by targeting Rab5-MEK-ERK pathway in endothelial cells[J]. Biosci Rep, 2019, 39(1): BSR20181218.
1
导镰, 王金华. 卵巢癌的发病机制与分子靶向治疗研究进展[J]. 肿瘤研究与临床, 2018, 30(3):204-207.
2
韩萍, 翟东霞, 张丹英, 等. 耐药性复发卵巢癌治疗药物的研究进展[J]. 医学研究杂志, 2018, 47(1):171-174.
3
王晓彤, 谭文华, 刘巍. 抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制[J]. 国际妇产科学杂志, 2018, 45(2):221-225.
4
Shi DB, Zheng HT, Zhuo CH, et al. Low expression of novel lncRNA RP11-462C24.1 suggests a biomarker of poor prognosis in colorectal cancer[J]. Medical Oncol, 2014, 31(7):31.
5
Gong Z, Li J, Cang P, et al. RPL34-AS1 functions as tumor suppressive ncRNA in esophageal cancer[J]. Biomed Pharmacother, 2019, 120:109440.
6
高瑶, 邹霞, 高军. miRNA在卵巢癌诊治及预后预测中作用的研究进展[J]. 山东医药, 2019, 59(3):87-90.
15
Yan S, Tang Z, Chen K, et al. Long noncoding RNA MIR31HG inhibits hepatocellular carcinoma proliferation and metastasis by sponging microRNA-575 to modulate ST7L expression[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):214.
7
焉春华, 史晓东, 于方飞, 等. MicroRNA-575靶向抑制BLID促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭[J]. 现代生物医学进展, 2017, 17(23):42-46, 134.
8
Wang YN, Xu F, Zhang P, et al. MicroRNA-575 regulates development of gastric cancer by targeting PTEN[J]. Biomed Pharmacother, 2019, 113:108716.
[1] 李康, 冀亮, 赵维, 林乐岷. 自噬在乳腺癌生物学进展中的双重作用[J]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2023, 17(04): 195-202.
[2] 孔莹莹, 谢璐涛, 卢晓驰, 徐杰丰, 周光居, 张茂. 丁酸钠对猪心脏骤停复苏后心脑损伤的保护作用及机制研究[J]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2023, 16(05): 355-362.
[3] 张晓燕, 肖东琼, 高沪, 陈琳, 唐发娟, 李熙鸿. 转录因子12过表达对脓毒症相关性脑病大鼠大脑皮质的保护作用及其机制[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2023, 19(05): 540-549.
[4] 陈荟竹, 郭应坤, 汪昕蓉, 宁刚, 陈锡建. 上皮性卵巢癌"二元论模型"的分子生物学研究现状[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2023, 19(04): 394-402.
[5] 刘星辰, 刘娟, 魏宝宝, 刘洁, 刘辉. XIAP与XAF1异常表达与卵巢癌的相关性分析[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2023, 19(04): 419-427.
[6] 江振剑, 蒋明, 黄大莉. TK1、Ki67蛋白在分化型甲状腺癌组织中的表达及预后价值研究[J]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2023, 17(06): 623-626.
[7] 刘硕儒, 王功炜, 张斌, 李书豪, 胡成. 新型溶瘤病毒M1激活内质网应激致前列腺癌细胞凋亡的机制[J]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2023, 17(04): 388-393.
[8] 郑嘉裕, 吴建杰, 李小娟, 曾恒达, 李国邦, 黄炯煅, 温星桥. hsa_circ_0090923在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞增殖和迁移的调控[J]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2023, 17(03): 276-283.
[9] 邵浩仁, 郭佳. 铁死亡的分子机制及其在前列腺癌治疗中的研究进展[J]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2023, 17(03): 294-298.
[10] 于迪, 于海波, 吴焕成, 李玉明, 苏彬, 陈馨. 发状分裂相关增强子1差异表达对胆固醇刺激下血管内皮细胞的影响[J]. 中华脑科疾病与康复杂志(电子版), 2023, 13(05): 264-270.
[11] 邓世栋, 刘凌志, 郭大勇, 王超, 黄忠欣, 张晖辉. 沉默SNHG1基因对膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移和铁死亡的影响[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(07): 804-811.
[12] 张敏洁, 张小杉, 段莎莎, 施依璐, 赵捷, 白天昊, 王雅晳. 氢气治疗心肌缺血再灌注损伤的作用机制及展望[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(06): 744-748.
[13] 方辉, 李菲, 张帆, 魏强, 陈强谱. 外源性瘦素对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜增殖的影响[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(05): 575-580.
[14] 郭如烨, 孟黎明, 陈楠, 宋玉莹, 尹海燕, 郭岩. Apelin/APJ系统对帕金森病模型的神经保护作用及机制研究进展[J]. 中华诊断学电子杂志, 2023, 11(04): 276-282.
[15] 邱甜, 杨苗娟, 胡波, 郭毅, 何奕涛. 亚低温治疗脑梗死机制的研究进展[J]. 中华脑血管病杂志(电子版), 2023, 17(05): 518-521.
阅读次数
全文


摘要

版权所有 中华医学会 中华医学电子音像出版社有限责任公司  京ICP备14006079号-1  网络出版服务许可证：(署)网出证(京)字第075号