槲皮素对人脑胶质瘤干细胞生物学行为及miR-29s家族的影响分析

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2018.03.001

目的

探讨分析槲皮素对人脑胶质瘤干细胞（BGSCs）生物学行为及miR-29s家族的影响。

方法

使用干细胞培养液对U87人脑胶质瘤细胞进行培养，采用CCK-8法检测槲皮素对BGSCs细胞增殖抑制率，采用流式细胞技术检测槲皮素对BGSCs细胞凋亡影响，并采用real-time PCR鉴定槲皮素对BGSCs细胞中miR-29a、miR-29b以及miR- 29c表达的影响。采用t检验以及方差分析进行统计学分析。

结果

随着槲皮素浓度的增加，BGSCs细胞增殖抑制率增加24 h 0 μg/ml（0.00±0.12）%、10 μg/ml（1.36±0.38）%、20 μg/ml（15.33±3.01）%、40 μg/ ml（29.50±4.57）%、80 μg/ml（40.21±6.42）%、160 μg/ml（61.21±7.48），F = 76.273，P < 0.05；48 h 0 μg/ml （0.09±0.05）%、10 μg/ml（9.84±2.17）%、20 μg/ml（28.57±3.84）%、40 μg/ ml（43.59±5.21）%、80 μg/ml（59.50±3.28）%、160 μg/ ml（70.21±9.48）%，F = 85.392，P < 0.05，且同浓度槲皮素作用48 h对BGSCs细胞增殖抑制率高于作用24 h（P < 0.05）。随着槲皮素浓度的升高，BGSCs细胞凋亡率升高[0 μg/ml（13.42±1.21）%、20 μg/ml（38.47±9.28）%、40 μg/ml（59.34±7.20）%、80 μg/ml（71.42±9.47）%，F = 57.493，P < 0.05]。不同浓度槲皮素处理BGSCs细胞后，可促进BGSCs细胞miR-29s家族miR- 29a/ b/ c相对表达量，且随着槲皮素浓度的增加，BGSCs细胞miR-29s家族相对表达量增加[miR-29a 0 μg/ml（1.04±0.08）、20 μg/ml（1.16±0.05）、40 μg/ml（1.30±0.10）、80 μg/ ml（1.41±0.09），F = 19.281，P < 0.05；miR-29b 0 μg/ml（1.06±0.09）、20 μg/ml（1.13±0.05）、40 μg/ml（1.25±0.07）、80 μg/ml（1.30±0.09），F = 13.427，P < 0.05；miR-29c 0 μg/ml（1.03±0.07）、20 μg/ml（1.15±0.03）、40 μg/ml（1.22±0.06）、80 μg/ml（1.31±0.08），F = 14.502，P < 0.05]。

结论

槲皮素可有效抑制人脑BGSCs增殖，促进人脑BGSCs凋亡，并促进人脑BGSCs中miR- 29s家族表达。

关键词: 槲皮素, 人脑胶质瘤干细胞, 生物学行为, 微RNAs

Objective

The effects of quercetin on the biological behavior of human glioma stem cells and the miR-29s family were investigated and analyzed.

Methods

The stem cell culture medium on U87 glioma cells were cultured to detect the inhibition rate of quercetin on the proliferation of BGSCs cells by CCK-8 method, and were detected by flow cytometry of quercetin on the apoptosis of BGSCs cells, the effect of real-time PCR on miR-29a miR-29b and the identification of quercetin and miR-29c expression in BGSCs cells.

Results

With the increase of quercetin concentration, the proliferation inhibition rate of BGSCs cells increased significantly [24 h 0 μg/ml (0.00±0.12) %, 10 μg/ml (1.36±0.38) %, 20 μg/ml (15.33±3.01) %, 40 μg/ml (29.50±4.57) %, 80 μg/ml (40.21±6.42) %, 160 μg/ml (61.21±7.48) , F = 76.273, P < 0.05; 48 h 0 μg/ml (0.09±0.05) %, 10 μg/ml (9.84±2.17) %, 20 μg/ml (28.57±3.84) %, 40 μg/ml (43.59±5.21) %, 80 μg/ ml (59.50±3.28) %, 160 μg/ml (70.21±9.48) %, F = 85.392, P < 0.05]. The inhibition rate of 48 h on BGSCs cells was significantly higher than that of 24 h (P < 0.05). With the increase of quercetin concentration, the apoptosis rate of BGSCs cells increased significantly [0 μg/ml (13.42±1.21)%, 20 μg/ml (38.47±9.28)%, 40 μg/ml (59.34±7.20)%, 80 μg/ml (71.42±9.47)%, F = 57.493, P < 0.05]. Quercetin treatment of different concentrations of BGSCs cells can promoted the relative expression of miR-29s family miR-29a/b/c in BGSCs cells. With the increase of quercetin concentration, the relative expression of miR-29s family in BGSCs cells increased significantly [miR-29a 0 μg/ml (1.04±0.08), 20 μg/ml (1.16±0.05), 40 μg/ml (1.30±0.10)、80 μg/ ml (1.41±0.09) , F = 19.281, P < 0.05; miR-29b 0 μg/ml (1.06±0.09) , 20 μg/ml (1.13±0.05) , 40 μg/ml (1.25±0.07) , 80 μg/ml (1.30±0.09) , F = 13.427, P < 0.05; miR-29c 0 μg/ml (1.03±0.07) , 20 μg/ml (1.15±0.03) , 40 μg/ml (1.22±0.06) , 80 μg/ml (1.31±0.08) , F = 14.502, P < 0.05].

Conclusion

Quercetin can effectively inhibit the proliferation of human glioma stem cells, promote the apoptosis of human glioma stem cells, and promote the expression of miR-29s family in human glioma stem cells.

Key words: Quercetin, Human glioma stem cells, Biological behavior, MicroRNAs

表1 不同浓度槲皮素对培养不同时间BGSCs细胞抑制率比较（%，±s）

浓度	24 h	48 h	t值	P值
0 μg/ml	0.00±0.12	0.09±0.05	1.548	0.160
10 μg/ml	1.36±0.38^*	9.84±2.17^*	8.607	0.000
20 μg/ml	15.33±3.01^*	28.57±3.84^*	6.068	0.000
40 μg/ml	29.50±4.57^*	43.59±5.21^*	4.546	0.002
80 μg/ml	40.21±6.42^*	59.50±3.28^*	5.983	0.000
160 μg/ml	61.21±7.48^*	70.21±9.48^*	1.667	0.134
F值	76.273	85.392	-	-
P值	0.000	0.000	-	-

表1 不同浓度槲皮素对培养不同时间BGSCs细胞抑制率比较（%，±s）

浓度	24 h	48 h	t值	P值
0 μg/ml	0.00±0.12	0.09±0.05	1.548	0.160
10 μg/ml	1.36±0.38^*	9.84±2.17^*	8.607	0.000
20 μg/ml	15.33±3.01^*	28.57±3.84^*	6.068	0.000
40 μg/ml	29.50±4.57^*	43.59±5.21^*	4.546	0.002
80 μg/ml	40.21±6.42^*	59.50±3.28^*	5.983	0.000
160 μg/ml	61.21±7.48^*	70.21±9.48^*	1.667	0.134
F值	76.273	85.392	-	-
P值	0.000	0.000	-	-

表2 不同浓度槲皮素对BGSCs细胞miR-29s家族表达的影响（±s）

浓度	miR-29a	miR-29b	miR-29c
0 μg/ml	1.04±0.08	1.06±0.09	1.03±0.07
20 μg/ml	1.16±0.05^a	1.13±0.05^a	1.15±0.03^a
40 μg/ml	1.30±0.10^ab	1.25±0.07^ab	1.22±0.06^ab
80 μg/ml	1.41±0.09^abc	1.30±0.09^abc	1.31±0.08^abc
F值	19.281	13.427	14.502
P值	0.000	0.000	0.000

表2 不同浓度槲皮素对BGSCs细胞miR-29s家族表达的影响（±s）

浓度	miR-29a	miR-29b	miR-29c
0 μg/ml	1.04±0.08	1.06±0.09	1.03±0.07
20 μg/ml	1.16±0.05^a	1.13±0.05^a	1.15±0.03^a
40 μg/ml	1.30±0.10^ab	1.25±0.07^ab	1.22±0.06^ab
80 μg/ml	1.41±0.09^abc	1.30±0.09^abc	1.31±0.08^abc
F值	19.281	13.427	14.502
P值	0.000	0.000	0.000

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Analysis of the effects of quercetin on the biological behavior of human glioma stem cells and the influence of miR-29s family

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