盐霉素与三氧化二砷对肾癌KCC853细胞生物学行为的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2017.01.003

目的

研究盐霉素（Sal）与三氧化二砷（As₂O₃）体外对人肾癌KCC853细胞生物学行为的影响。

方法

采用MTT法检测单药及联合用药对KCC853细胞株的抑制效应；运用集落实验检测两种药物对细胞菌落增殖的影响；利用细胞划痕试验观察两种药物对细胞迁移的影响；利用Hoechst33258染色法观察单药及联合用药对KCC853细胞凋亡的形态变化。采用方差分析及F检验进行统计学分析。

结果

Sal与As₂O₃在体外对KCC853细胞的增殖具有抑制作用，不同浓度（0.16、0.8、4、20、100μg/ml）的Sal对KCC853细胞的抑制率分别为：6.9﹪、10.8﹪、19.4﹪、58.5﹪、96.0﹪；不同浓度（0.008、0.04、0.2、1、5μg/ml）的As₂O₃对KCC853细胞的抑制率分别为：7.0﹪、7.7﹪、15.0﹪、48.4﹪、86.6﹪；联合用药组对KCC853细胞的抑制率分别为：18.9﹪、21.4﹪、40.4﹪、54.7﹪、95.8﹪。表现出一定的浓度依赖性，P < 0.05。在细胞集落抑制实验中，Sal对KCC853细胞集落的制率为：37.23﹪；As₂O₃对KCC853细胞集落的制率为：43.83﹪；联合用药组与Sal、As₂O₃单药组相比效果更显著，其抑制率达到57.5﹪，P < 0.01。进一步研究发现：Sal与As₂O₃能有效抑制KCC853细胞的迁移能力。

结论

低剂量的盐霉素与As₂O₃能有效地抑制KCC853细胞的生长和迁移，并能促进其凋亡。

关键词: 盐霉素, 三氧化二砷, 生物学, 肾肿瘤

Objective

To study the effect of salinomycin and arsenic trioxide on human renal cancer cell lines KCC853.

Method

The effects of salinomycin and arsenic trioxide alone or in combination on cell proliferation, migration and apoptosis were analyzed using MTT method, cell colony test, cell scratch test and Hoechst 33258 staining method, respectively. Statistical analysis was performed by analysis of variance andFtest.

Result

In vitro, salinomycin (0.16, 0.8, 4, 20, 100μg/ml) and arsenic trioxide (0.008, 0.04, 0.2, 1, 5μg/ml) alone could inhibit the proliferation of KCC853 cells in a concentration-dependent manner and time-dependent manner. The inhibition rate were 6.9﹪、10.8﹪、19.4﹪、58.5﹪、96.0﹪,7.0﹪、7.7﹪、15.0﹪、48.4﹪、86.6﹪, respectively. Synergic inhibitory effect was 18.9﹪、21.4﹪、40.4﹪、54.7﹪、95.8﹪observed when the two agents were used. theP< 0.05. In the cell colony test, colony inhibition rate were 37.23﹪and 43.83﹪for salinomycin and arsenic trioxide respectively. The inhibition rate was 57.5﹪when the two agents were used. Further study found, salinomycin and arsenic trioxide could inhibit the migratory ability of KCC853 cells.

Conclusion

Low doses of salinomycin and arsenic trioxide could inhibit the proliferation and migration of KCC853 cells significantly, and promote cell apoptosis.

Key words: Salinomcin, Arsenic trioxide, Biology, Kidney neoplasms

图1 Sal对KCC853细胞增殖的抑制作用

图2 As₂O₃对KCC853细胞增殖的抑制作用

图3 Sal联合As₂O₃对KCC853细胞的生长抑制作用

表1 不同浓度Sal与As₂O₃对KCC853细胞增殖的抑制结果

浓度（μg/ml）Sal/As₂O₃		抑制率（﹪， ± s）		F值	P值
浓度（μg/ml）Sal/As₂O₃	Sal	As₂O₃	Sal+ As₂O₃	F值	P值
0.16/0.008	6.9±0.52	7.0±0.56	18.9±0.70	0.93	P > 0.05
0.8/0.04	10.8±0.36	7.7±0.98	21.4±0.53	0.24	P < 0.01
4/0.2	19.4±1.51	15.0±0.85	40.4±1.39	0.48	P < 0.05
20/1	58.5±1.87	48.4±2.25	54.7±1.15	0.71	P < 0.01
100/5	96.0±1.42	86.6±0.72	95.8±0.72	0.41	P < 0.01

表1 不同浓度Sal与As₂O₃对KCC853细胞增殖的抑制结果

浓度（μg/ml）Sal/As₂O₃		抑制率（﹪， ± s）		F值	P值
浓度（μg/ml）Sal/As₂O₃	Sal	As₂O₃	Sal+ As₂O₃	F值	P值
0.16/0.008	6.9±0.52	7.0±0.56	18.9±0.70	0.93	P > 0.05
0.8/0.04	10.8±0.36	7.7±0.98	21.4±0.53	0.24	P < 0.01
4/0.2	19.4±1.51	15.0±0.85	40.4±1.39	0.48	P < 0.05
20/1	58.5±1.87	48.4±2.25	54.7±1.15	0.71	P < 0.01
100/5	96.0±1.42	86.6±0.72	95.8±0.72	0.41	P < 0.01

图4 倒置显微镜下观察Sal与As₂O₃对KCC853细胞形态的影响（×10）

图5 倒置显微镜下观察Sal与As₂O₃对KCC853细胞迁移的影响（×10）

图6 荧光显微镜下观察KCC853细胞凋亡的形态变化（Hoechst33258染色，×40）

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