补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和周期调控及雌激素受体β表达的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2018.01.001

中华细胞与干细胞杂志(电子版) ›› 2018, Vol. 08 ›› Issue (01) : 1 -5. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2018.01.001

所属专题：文献；

论著

补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和周期调控及雌激素受体β表达的影响

李少鹏¹, 蔡建通¹^,^†(

), 翁铭芳², 游翰林³, 陈书尚⁴, 吴卫真⁴

^1. 362700，石狮市医院泌尿外科
^2. 350025　福州，福建医科大学福总临床医学院泌尿外科
^3. 350025　福州，福建医科大学协和临床医学院
^4. 350025　福州，厦门大学附属东方医院（福州总医院）泌尿外科

收稿日期:2017-09-19 出版日期:2018-02-01
通信作者: 蔡建通
基金资助:
国家自然科学基金青年创新基金(81402107); 福建省自然基金面上项目(2016J01475)

Effect of psoralen on the proliferation and cell cycle regulation of prostate cancer LNCaP-AI cell as well as its expression of estrogen-related receptor β

Shaopeng Li¹, Jiantong Cai¹^,^†(), Mingfang Weng², Hanlin You³, Shushang Chen⁴, Weizhen Wu⁴

^1. Department of Urology, Shishi Hosptial, Shishi 362700, China
^2. Department of Urology, Fujian Medical University Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025, China
^3. Union Clinical Medical College of Fujian Medical University, Fuzhou 350001, China
^4. Department of Urology, Affiliated Dongfang Hospital of Xiamen University, Fuzhou 350025, China

Received:2017-09-19 Published:2018-02-01
Corresponding author: Jiantong Cai
About author:
Corresponding author:Cai Jiantong, Email:40343508@qq.com

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引用本文：

李少鹏, 蔡建通, 翁铭芳, 游翰林, 陈书尚, 吴卫真. 补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和周期调控及雌激素受体β表达的影响[J]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2018, 08(01): 1-5.

Shaopeng Li, Jiantong Cai, Mingfang Weng, Hanlin You, Shushang Chen, Weizhen Wu. Effect of psoralen on the proliferation and cell cycle regulation of prostate cancer LNCaP-AI cell as well as its expression of estrogen-related receptor β[J]. Chinese Journal of Cell and Stem Cell(Electronic Edition), 2018, 08(01): 1-5.

目的

探讨补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖的影响，并初步探索其可能的作用机制。

方法

不同浓度补骨脂素处理体外培养的前列腺癌LNCaP-AI细胞，采用CCK-8法检测各组的细胞增殖变化，Western blot法检测各组细胞Ki67蛋白表达，流式细胞术检测各组细胞周期的变化，实时定量RT-PCR法检测各组细胞雌激素受体β（ERβ）mRNA的表达。组间均数比较均采用单因素方差分析。

结果

CCK-8检测结果显示，补骨脂素对LNCaP-AI细胞增殖的抑制呈浓度—时间依赖性增强。Western blot法、流式细胞术和实时定量RT-PCR检测结果分别显示，不同浓度补骨脂素（30，50，100 μg/ml）处理48 h后，随着药物浓度的增加，LNCaP-AI细胞的Ki67蛋白表达明显降低，分别为27.82±0.55、25.27±0.62、23.93±0.50和22.54?±0.59（F = 28.59，P < 0.01）；G1期分别为72.14±0.5、74.57±1.22、78.12±0.92、79.36±0.49和80.6?±1.42（F = 38.26，P < 0.01）；G2期分别为27.57±0.5、23.2±1.39、16.41±1.23、12.23±1.3和7.47±1.03（F = 216.63，P < 0.01）细胞均随之增多，而S期细胞则随之减少，分别为0.29±0.07、2.23?±0.32、5.47±0.44、8.41±0.95和11.93±0.57（F = 153.58，P?< 0.01）；ERβ mRNA的表达量明显升高，分别为1±0 、2.197±0.225、4.573±0.346和6.590±0.334（F?= 264.09，P < 0.01）。

结论

补骨脂素具有抑制前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和Ki67表达的作用，其机制可能与其将细胞阻滞于G1、G2期和上调ERβ mRNA的表达有关。

关键词: 补骨脂素, 前列腺癌, Ki67, 雌激素受体

Objective

To explore the effect of psoralen on the proliferation and cell cycle regulation of prostate cancer LNCaP-AI cellas well as its expression of estrogen-related receptor β.

Methods

LNCaP-AI cells were subjected to treatment with different concentrations of Psoralen in vitro. The proliferation, expression of Ki67 protein, cell cycles and expression of estrogen-related receptor β (ER β) mRNA of LNCaP-AI cells were detected with CCK-8 test, Western blotting, flow cytometry assay and real-time quantitative RT-PCR, respectively.

Results

CCK-8 test showed that psoralen significantly inhibited the proliferation of LNCaP-AI cells in a dose-and time-dependent manner. After treatment with different concentrations of psoralen (30, 50 or 100 μg/ml) for 48 h, LNCaP-AI cells down-regulated expression of Ki67 protein by Western blotting (F = 28.59, P < 0.01). Meanwhile, more cells were arrested at G1 and G2 stage but fewer at S stage as shown by flow cytometry (F = 38.26, 216.634, 153.584, P < 0.01 for all). In addition, increased transcription of ERβ mRNA in LNCaP-AD cells was verified by real-time quantitative RT-PCR (F = 264.09, P < 0.01).

Conclusion

Psoralen can inhibit the proliferation of LNCaP-AI cells and Ki67 expression. The possible mechanism may include inducing cell-cycle arrest at G1, G2 stage and the up-regulation of ERβ mRNA expression in LNCaP-AI cells.

Key words: Psoralen, Prostate cancer, LNCaP-AI, Ki67, Estrogen-related receptor

表1 ERβ及内参β-actin的引物序列

基因	引物
ERβ	F:5'-ACCAAAGCATCGGTCACG-3'
?	R:5'-CATGATCCTGCTCAATTCCA-3'
β-actin	5'-GTTGTCGACGACGAGCG-3'
?	R:5'-GCACAGAGCCTCGCCTT-3'

表1 ERβ及内参β-actin的引物序列

基因	引物
ERβ	F:5'-ACCAAAGCATCGGTCACG-3'
?	R:5'-CATGATCCTGCTCAATTCCA-3'
β-actin	5'-GTTGTCGACGACGAGCG-3'
?	R:5'-GCACAGAGCCTCGCCTT-3'

表2 补骨脂素干预后不同时间培养的LNCaP-AI细胞生存率的变化（n = 18，﹪，±s）

分组	24 h	48 h	72 h	F值	P值
0 μg/ml	1.00±0.00	1.00±0.00	1.00±0.00	-	-
10 μg/ml	0.92±0.07	0.85±0.07	0.77±0.06	7.61	0.01
30 μg/ml	0.83±0.07	0.78±0.06	0.72±0.06	4.48	0.03
50 μg/ml	0.77±0.09	0.71±0.04	0.66±0.06	4.10	0.04
100 μg/ml	0.71±0.04	0.64±0.05	0.59±0.09	5.28	0.02
F值	17.35	48.49	35.81	?	?
P值	< 0.01	< 0.01	< 0.01	?	?

表2 补骨脂素干预后不同时间培养的LNCaP-AI细胞生存率的变化（n = 18，﹪，±s）

分组	24 h	48 h	72 h	F值	P值
0 μg/ml	1.00±0.00	1.00±0.00	1.00±0.00	-	-
10 μg/ml	0.92±0.07	0.85±0.07	0.77±0.06	7.61	0.01
30 μg/ml	0.83±0.07	0.78±0.06	0.72±0.06	4.48	0.03
50 μg/ml	0.77±0.09	0.71±0.04	0.66±0.06	4.10	0.04
100 μg/ml	0.71±0.04	0.64±0.05	0.59±0.09	5.28	0.02
F值	17.35	48.49	35.81	?	?
P值	< 0.01	< 0.01	< 0.01	?	?

图1 不同浓度补骨脂素对LNCaP-AI细胞Ki67蛋白表达的影响

表3 流式细胞仪检测不同浓度补骨脂素对LNCaP-AI细胞周期的影响（﹪，±s）

分组	G1期	S期	G2期
对照组	72.14±0.50	27.57±0.50	0.29±0.07
10 μg/ml	74.57±1.22	23.20±1.39	2.23±0.32
30 μg/ml	78.12±0.92	16.41±1.23	5.47±0.44
50 μg/ml	79.36±0.49	12.23±1.30	8.41±0.95
100 μg/ml	80.60±1.42	7.47±1.03	11.93±0.57
F值	38.26	153.58	216.63
P值	< 0.01	< 0.01	< 0.01

表3 流式细胞仪检测不同浓度补骨脂素对LNCaP-AI细胞周期的影响（﹪，±s）

分组	G1期	S期	G2期
对照组	72.14±0.50	27.57±0.50	0.29±0.07
10 μg/ml	74.57±1.22	23.20±1.39	2.23±0.32
30 μg/ml	78.12±0.92	16.41±1.23	5.47±0.44
50 μg/ml	79.36±0.49	12.23±1.30	8.41±0.95
100 μg/ml	80.60±1.42	7.47±1.03	11.93±0.57
F值	38.26	153.58	216.63
P值	< 0.01	< 0.01	< 0.01

图2 流式细胞仪检测不同浓度补骨脂素对LNCaP-AI细胞周期的影响

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