CD68、CD133和TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2017.05.007

目的

研究CD68⁺肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）、CD133⁺肿瘤干细胞（CSCs）及TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义。

方法

选取2014年1月至2016年1月在中国医学科学院肿瘤医院综合科进行手术治疗的89例肝癌患者为研究对象。收集患者手术标本，进行免疫组化染色（IHC），采用半定量积分法对免疫组化分析正常、癌及癌旁组织中CD68⁺肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）、CD133⁺肿瘤干细胞（CSCs）及TGF-β表达情况，结合随访资料对其意义进行分析，其表达水平与临床病例资料之间关系采用χ²检验或Fisher确切概率法检验或Wilcoxon秩和检验，相关性分析采用Spearman检验。

结果

CD68⁺TAMs细胞在癌组织中阳性率为59.55﹪，癌旁组织为37.08﹪，差异具有统计学意义（Z =-3.182，P = 0.001）；CD133⁺细胞在癌组织中阳性率为52.81﹪，癌旁组织中为57.30﹪，表达差异无统计学意义（Z?=-?0.558，P = 0.557）；TGF-β在癌组织阳性率为70.79﹪，癌旁组织中为56.18﹪，差异具有统计学意义（Z =-2.306，P = 0.021）。CD68、CD133、TGF-β表达水平与患者肿瘤分化程度及淋巴结转移情况密切相关，差异具有统计学意义（P < 0.05）；TGF-β表达水平与Child-Pugh分级相关，差异具有统计学意义（χ²= 10.930，P = 0.001）。HCC癌组织中CD68与TGF-β表达，CD133与TGF-β表达之间存在正相关关系，相关系数分别为（r = 0.579、0.611，P = 0.026、0.020）。Kaplan-Meier生存曲线分析可知，3种分子均无表达的患者中位生存时间最长，为23.4个月，3种分子均有表达的患者中位生存期最短，仅为6.3个月（P = 0.021）。

结论

CD68⁺TAMs细胞与CD133⁺CSCs细胞之间存在相关性，二者之间具体机制有待进一步研究，以便为肝细胞癌（HCC）治疗提供有力依据。

关键词: 肝细胞癌, CD68, CD133, 转化生长因子β

Objective

To study the expression of CD68⁺tumor-associated macrophages (TAMs), CD133⁺ cancer stem cells (CSCs) and TGF-βin hepatocellular carcinoma (HCC) and correlation with the prognosis of patients.

Methods

89 patients with HCC, who underwent surgery at our center from Jan 2014 to Jan 2016, were enrolled in this study. The tissue samples were processed by IHC to analyze the expression of CD68⁺TAMs, CD133⁺CSCs and TGF-βby semi-quantative scoring methods. The data were further interpreted with the follow-up information of patients, and χ², Fisher or Wilcoxon rank sum test was used to analyze the relation between the expression of CD68⁺TAMs, CD133⁺CSCs and TGF-βand the follow-up information of patients. The correlation of CD68⁺TAMs, CD133⁺CSCs and TGF-βwith the survival of HCC patients was analyzed by the Spearman test.

Results

The tumors had significantly higher levels of CD68⁺TAMs (59.55﹪) and TGF-β(70.79﹪) expression than their adjacent normal tissues (37.08﹪and 56.18﹪) respectively (Z?=-3.182, P = 0.001,Z =-2.306, P = 0.021) . No significant difference was found in the CD133⁺CSCs expression levels between the tumors (52.81﹪) and their adjacent normal tissues (57.30﹪) (Z?=?-0.558, P = 0.557). The expression levels of CD68, CD133 and TGF-βwere positively correlated with the degree of tumor differentiation and lymphatic metastases (P < 0.05). The TGF-βexpression levels were positively correlated with the Child-Pugh scores (χ²= 10.930, P?=?0.001). In the HCC tissue, positive correlations were found between the CD68 and TGF-βlevels (r = 0.579,P?< 0.05), and the CD133 and TGF-βlevels (r = 0.611,P < 0.05), respectively. Patients with negative expression of all the three molecules had the longest survival time, which was 23.4 months, and patients with positive expression of all the three molecules had the shortest survival time, which was 6.3 months as analyzed by Kaplan-Meier assay.

Conclusion

CD68⁺TAMs may influence CD133⁺CSCs, and further study is needed to elaborate the possible mechanism for the treatment of HCC in clinic.

Key words: Hepatocellular carcinoma, CD68, CD133, Transforming growth factor beta

表1 CD68、CD133及TGF-β在HCC组织及癌旁组织中的表达

分组	例数	组织来源	表达水平（例）				Z值	P值
分组	例数	组织来源	-	+	++	+++	Z值	P值
CD68	89	癌组织	36	14	21	18	-?3.182	0.001
CD68	89	癌旁组织	56	13	11	9	-?3.182	0.001
CD133	89	癌组织	42	15	20	12	-?0.558	0.557
CD133	89	癌旁组织	38	17	20	14	-?0.558	0.557
TGF-β	89	癌组织	26	15	32	16	-?2.319	0.020
TGF-β	89	癌旁组织	39	18	21	11	-?2.319	0.020

表1 CD68、CD133及TGF-β在HCC组织及癌旁组织中的表达

分组	例数	组织来源	表达水平（例）				Z值	P值
分组	例数	组织来源	-	+	++	+++	Z值	P值
CD68	89	癌组织	36	14	21	18	-?3.182	0.001
CD68	89	癌旁组织	56	13	11	9	-?3.182	0.001
CD133	89	癌组织	42	15	20	12	-?0.558	0.557
CD133	89	癌旁组织	38	17	20	14	-?0.558	0.557
TGF-β	89	癌组织	26	15	32	16	-?2.319	0.020
TGF-β	89	癌旁组织	39	18	21	11	-?2.319	0.020

图1 Leica光学显微镜下观察CD68、CD133及TGF-β在正常、HCC及癌旁组织中的表达（×200）

表2 CD68、CD133、TGF-β表达与临床病理参数的关系(例)

临床病理参数		例数	CD68		χ²/Z值	P值	CD133		χ²/Z值	P值	TGF-β		χ²/Z值	P值
临床病理参数		例数	+	-	χ²/Z值	P值	+	-	χ²/Z值	P值	+	-	χ²/Z值	P值
年龄		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	< 50岁	34	21	13	0.281	0.596	16	18	0.730	0.393	25	9	0.200	0.655
?	≥50岁	55	37	18	?	?	31	24	?	?	38	17	?	?
性别		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	男	51	35	16	0.630	0.428	29	22	0.788	0.375	36	15	0.002	0.962
?	女	38	23	15	?	?	18	20	?	?	27	11	?	?
肿瘤分化程度		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	高分化	8	2	6	-2.584	0.010	5	3	-3.762	0.000	3	5	-3.109	0.002
?	中等分化	52	33	19	?	?	36	16	?	?	34	18	?	?
?	低分化	29	23	6	?	?	6	23	?	?	26	3	?	?
病灶数量		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	单发	37	21	16	1.974	0.160	18	19	0.440	0.507	24	13	1.074	0.300
?	多发	52	37	15	?	?	29	23	?	?	39	13	?	?
肿瘤大小		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	≤5 cm	41	23	18	2.756	0.097	21	20	0.077	0.781	27	14	0.895	0.344
?	> 5 cm	48	35	13	?	?	26	22	?	?	36	12	?	?
淋巴结转移		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	有	26	20	6	4.602	0.032	21	5	11.522	0.001	23	3	5.549^*	0.021^*
?	无	63	33	30	?	?	26	37	?	?	40	23	?	?
Child-Puge分级		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	A	50	26	24	2.701	0.100	24	26	0.810	0.368	29	21	10.930^*	0.001^*
?	B	39	27	12	?	?	15	24	?	?	35	4	?	?

表2 CD68、CD133、TGF-β表达与临床病理参数的关系(例)

临床病理参数		例数	CD68		χ²/Z值	P值	CD133		χ²/Z值	P值	TGF-β		χ²/Z值	P值
临床病理参数		例数	+	-	χ²/Z值	P值	+	-	χ²/Z值	P值	+	-	χ²/Z值	P值
年龄		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	< 50岁	34	21	13	0.281	0.596	16	18	0.730	0.393	25	9	0.200	0.655
?	≥50岁	55	37	18	?	?	31	24	?	?	38	17	?	?
性别		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	男	51	35	16	0.630	0.428	29	22	0.788	0.375	36	15	0.002	0.962
?	女	38	23	15	?	?	18	20	?	?	27	11	?	?
肿瘤分化程度		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	高分化	8	2	6	-2.584	0.010	5	3	-3.762	0.000	3	5	-3.109	0.002
?	中等分化	52	33	19	?	?	36	16	?	?	34	18	?	?
?	低分化	29	23	6	?	?	6	23	?	?	26	3	?	?
病灶数量		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	单发	37	21	16	1.974	0.160	18	19	0.440	0.507	24	13	1.074	0.300
?	多发	52	37	15	?	?	29	23	?	?	39	13	?	?
肿瘤大小		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	≤5 cm	41	23	18	2.756	0.097	21	20	0.077	0.781	27	14	0.895	0.344
?	> 5 cm	48	35	13	?	?	26	22	?	?	36	12	?	?
淋巴结转移		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	有	26	20	6	4.602	0.032	21	5	11.522	0.001	23	3	5.549^*	0.021^*
?	无	63	33	30	?	?	26	37	?	?	40	23	?	?
Child-Puge分级		?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?	?
?	A	50	26	24	2.701	0.100	24	26	0.810	0.368	29	21	10.930^*	0.001^*
?	B	39	27	12	?	?	15	24	?	?	35	4	?	?

图2 CD68、CD133、TGF-β表达与患者生存期之间关系

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Expression and clinical significance of CD68, CD133 and TGF-β in hepatocellular carcinoma and adjacent normal tissues

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